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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗ti，可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。

4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。

性状亮蓝为有金属光泽的深紫色至青铜色颗粒或粉末，无臭。易溶于水，水溶液呈亮蓝色；可溶于乙醇、丙二醇和甘油。耐光性、耐热性、耐酸性、耐盐性和耐微生物性很好，耐碱性和耐氧化还原特性较佳。弱酸时呈青色，强酸时呈***，在沸腾碱液中呈紫色 [1]  。性能亮蓝的色度极强，通常都是与其他食用着色剂配合使用，使用量小，在0.0005%~0.01%之间 [1]  。应用根据我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）中规定：亮蓝可用于果味型饮料（液、固体）、果汁型饮料、汽水、配制酒、糖果、糕点上彩装、红绿丝、罐头、浓缩果汁、青梅、对虾片，使用量为0.025g/kg；冰淇淋，使用量为0.021999g/kg。考马斯亮蓝g-250染色法测定蛋白质含量与其他方法相比有什么优缺点蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。红绿丝的使用量可加倍；果味粉着色剂加入量按稀释倍数的50%加入 [1]  。

保存期为5年 《食用添加剂应用质量标准》（GB2760-1996）中要求：亮蓝可用于果味型饮料（液、固态）、水果汁型饮料、碳酸饮料、配制酒、糖块、点心上彩装、红绿丝、水果罐头、浓缩汁、青梅、对虾片，使用量为0.025g/kg；冰激凌，使用量为0.021999g/kg。红绿丝的使用量可翻倍；果味粉添加剂添加量按稀释液倍率的50%添加 【使用说明】 将规范称重的本产品放置器皿中，慢慢添加适量温开水，并持续拌和使之彻底融解，个人所得水溶液就可以用于上色。 应用全过程中应留意尽量减少或降低酸、碱、y化剂、氧化剂、金属材料电离、微生物等化学物质的影响，并留意防止受高溫与曝晒，防止退色或变色。3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(***hao用PBS)。

亮蓝为有金属质感的浅紫色至古铜色颗粒物或粉末状，无臭。溶于于水，溶液呈亮蓝色；可溶精、丙二醇和凡士林。耐光性性、耐温性、耐碱性、耐盐性和耐微生物性非常好，耐酸性和耐氧化还原反应特点。弱酸性时呈青色，强碱时呈***，在烧开溶液中呈蓝紫色 。 亮蓝的饱和度极强，一般全是与别的服用添加剂相互配合应用，使用量小，在0.0005%~0.01%中间。注意，显色反应不得超过30min．6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。 装饰艺术蔬菜水果、可可制品、巧克力朱古力制品(包含可可脂朱古力及制品）及其糖块（05.01.01可可制品、05.04装饰设计糖块、顶饰和甜汁以外）、点心上彩装。客户在应用本产品前要认真阅读GB2760《食用添加剂应用质量标准》，每个纯色种类的应用范畴和使用量会大不一样。